В биологических исследованиях обычно используют полипептиды с длинной последовательностью.Для пептидов с более чем 60 аминокислотами в последовательности для их получения обычно используют экспрессию генов и SDS-PAGE.Однако этот метод занимает много времени, и эффект разделения конечного продукта не является хорошим.
Проблемы и решения синтеза длинных пептидов
При синтезе длинных пептидов мы всегда сталкиваемся с проблемой: стерические затруднения реакции конденсации увеличиваются с увеличением последовательности в синтезе, и время реакции необходимо корректировать, чтобы реакция завершилась.Однако чем дольше время реакции, тем больше побочных эффектов возникает и образуется часть целевого пептида.Такие остатки – дефицитные пептидные цепи – являются ключевыми примесями, образующимися при синтезе длинных пептидов.Таким образом, при синтезе длинного пептида ключевой проблемой, которую мы должны решить, является изучение высококачественных условий реакции и методов реакции, чтобы сделать реакцию конденсации аминокислот более всеобъемлющей и полной.Кроме того, сократите время реакции, поскольку чем дольше время реакции, тем больше неконтролируемых побочных реакций и тем сложнее побочные продукты.Таким образом, суммируются следующие три пункта:
Микроволновой синтез может быть использован: Для некоторых аминокислот, встречающихся в процессе синтеза и которые нелегко интегрировать, можно использовать микроволновый синтез.Этот метод дает замечательные результаты, значительно сокращает время реакции и уменьшает образование двух ключевых побочных продуктов.
Можно использовать метод синтеза фрагментов.: Когда некоторые пептиды трудно синтезировать обычными методами синтеза и нелегко очистить, мы можем применить полную конденсацию нескольких аминокислот в определенном сегменте пептида к пептидной цепи в целом.Этот метод также позволяет решить многие проблемы синтеза.
Синтез ацилгидразида может быть использован: ацилгидразидный синтез пептидов представляет собой метод твердофазного синтеза N-концевого пептида Cys и C-концевого полипептида гидразида с химической селективной реакцией между образованием амидных связей для достижения метода пептидной связи.В зависимости от положения Cys в пептидной цепи этот метод делит всю пептидную цепь на несколько последовательностей и синтезирует их соответственно.Наконец, целевой пептид получают посредством реакции жидкофазной конденсации.Этот метод не только значительно сокращает время синтеза длинного пептида, но и существенно повышает чистоту конечного продукта.
Длительная очистка пептидов
Особенность длинных пептидов неизбежно приводит к образованию сложных компонентов неочищенных пептидов.Следовательно, очистка длинных пептидов с помощью ВЭЖХ также является сложной задачей.амилоидная серия процесса очистки полипептидов, вобравшая в себя большой опыт и успешно используемая при очистке длинных пептидов.Благодаря внедрению нового оборудования, смешиванию нескольких систем очистки, повторному разделению и другим экспериментальным методам уровень успеха очистки длинных пептидов был значительно улучшен.
Время публикации: 18 апреля 2023 г.