Рекомбинантные белковые антигены часто имеют несколько различных эпитопов, некоторые из которых являются эпитопами последовательности, а некоторые являются структурными эпитопами.Поликлональные антитела, полученные иммунизацией животных денатурированными антигенами, представляют собой смеси антител, специфичных к отдельным эпитопам, и в целом могут использоваться для обнаружения природных структур или денатурированных белков-мишеней.Побочным преимуществом использования денатурированных белков в качестве иммуногенов является то, что денатурированные белки, как правило, более иммуногенны и могут стимулировать сильный иммунный ответ у животных.
Для антигенных целей обычно выбирают систему экспрессии Escherichia coli, поскольку это наиболее затратная система с точки зрения времени и денег.Чтобы улучшить возможность экспрессии целевого белка и удобство очистки, иногда экспрессируется только небольшой фрагмент целевого белка, например специфический домен.
Трехмерная структура белков
Специфический домен белка
Если целью приготовления антител является исключительно обнаружение wb, экономично и быстро использовать синтетический небольшой пептид в качестве антигена, но существует риск слабой иммуногенности или негенности из-за неправильного выбора пептидного сегмента.Поскольку приготовление антител требует длительного периода, для приготовления антител с использованием полипептидного антигена часто выбирают два или три различных пептидных сегмента, чтобы гарантировать успех эксперимента.
Чистота полипептидного антигена для иммунизации должна быть более 80%.Хотя более высокая чистота теоретически позволяет получить антитела с большей специфичностью, на практике животные всегда производят большое количество неспецифических антител, маскируя тем самым преимущества чистоты антигена.
Кроме того, препарат антител из небольших пептидов необходимо сшить с соответствующим антигеном-носителем для повышения его иммуногенности.Двумя распространенными антигенными носителями являются KLH и BSA.
Время публикации: 23 марта 2023 г.