Обзор экспрессии белка

Белковая экспрессия относится к технологии воспроизведения гена-мишени в искусственный вектор, а затем внедряет его в клетку-реципиента или бесклеточную систему для экспрессии белка в гетерологичной системе.

Экспрессия белка может решить проблему, которую трудно получить нативными белками. С момента первого создания гетерологичной экспрессии белка в 1970 -х годах были успешно экспрессируются тысячи рекомбинантных белков, что эффективно способствует непрерывному развитию биотехнологии и биомедицинских исследований и промышленности.

Цель:

Благодаря экспрессии белка сначала возможно получить белки, которые трудно получить из природных источников.

Во -вторых, большая партия и высокая чистота продуктов экспрессии белка не только облегчают анализ целевого белка, но и значительно снижают стоимость.

Что еще более важно, рекомбинантные белки обычно выбираются, чтобы указать высокую биобезопасность клетки -хозяина, что позволяет избежать некоторых потенциальных рисков биобезопасности патогенного хозяина.

Метод:

В основном он включает в себя процессы репликации фрагмента генов, введение в систему экспрессии, индуцированную экспрессию, очистку продукта и анализ.

Обзор экспрессии белка

Классификация:

Системы экспрессии белка, как правило, можно разделить на:

1. Система ядерной экспрессии: Escherichia coli является наиболее распространенной системой экспрессии белка, которая имеет преимущества четкого генетического фона, удобного размножения, низкой стоимости и высокой экспрессии. Тем не менее, ему не хватает механизма модификации трансляции и не подходит для гликозилирования или специального расщепления точек отбора для модификации экспрессии белка. Bacillus subtilis также может использоваться для экспрессии белка, а его преимуществами являются сильная способность метаболической экспрессии и низкая активность протеазы, которая постепенно привлекает внимание.

2. Система эукариотической экспрессии: определенная степень гликозилирования может быть достигнута после трансляции, что ближе к естественной активности эукариотических белков. Это в основном включено. ① Система экспрессии дрожжей (общие красные дрожжи, варевые дрожжи и т. Д.), Дрожжи могут быть мягкими, могут быть модифицированы после трансляции, имеют преимущества прокариотических и эукариотических клеток-хозяев, а также хорошая система экспрессии белка. ② Система экспрессии клеток насекомых: экзогенные гены трансфицируют в клетки насекомых вектором бакуловируса для экспрессии. Это система высокой экспрессии для эукариотических белков, которая подходит для мембранных белков, макромолекулярных белков, протеинкиназ и других белков, которые трудно экспрессировать в прокариотической системе. ③ Система экспрессии клеток млекопитающих: эффективность трансляции и украшения клеток млекопитающих намного выше, чем у систем дрожжей и клеток насекомых. Структура и функция клеток млекопитающих ближе к нативным эукариотическим белкам, но уровень экспрессии низкий, а стоимость высока.

3. Бесклеточная система экспрессии: целевые белки могут экспрессироваться непосредственно из частиц и продуктов ПЦР, а система экспрессии-это бесклеточные экстракты из Escherichia coli, эмбрионов пшеницы, ретикулоцитов кролика и т. Д. Преимущества бесклеточной экспрессии белка-это способность экспрессировать продукты, которые трудно экспрессировать в других системах, высокой пропускной способности и автоматизации, но низкой экспрессии и высокой затрат.