1. Какие примеси есть в не-HPLC очищенных?
A: Модифицированные пептидные и не модифицированные пептидные примеси в сыром и опреснительном модифицированном пептиде: такие как неполный модифицированный пептид и некоторые сырья, такие как DTT, TFA и т. Д.
2. Какие примеси очищены ВЭЖХ?
A: Модифицированный пептид, очищенный от ВЭЖХ, все еще будет иметь много примесей, а примеси обычно представляют собой короткие пептиды и небольшой TFA.
3. Как долго это подходит?
A: Синтез модифицированного пептида должен учитывать длину модифицированного пептида, заряда, гидрофильности и гидрофобности и других факторов. Чем дольше общая длина, тем ниже чистота и урожайность грубого продукта, а тем выше сложность очистки и вероятность сложности синтеза. Тем не менее, невозможно изменить последовательность функционального домена модифицированного пептида, но для завершения синтеза модифицированного пептида иногда могут быть добавлены только некоторые вспомогательные аминокислоты вверх и ниже по течению от функционального домена, чтобы улучшить содействие и гидрофобичность модифицированного пептида. Если модифицированный пептид слишком короткий, в синтезе могут возникнуть проблемы. Первая проблема заключается в том, что синтезированный модифицированный пептид имеет определенные трудности в процессе постобработки. Модифицированный пептид в пределах 5 пептидов обычно имеет гидрофобные аминокислоты, в противном случае пост-обработка сложна. Модифицированные пептиды ниже 15 аминокислотных остатков обычно могут быть получены с удовлетворительным выходом и урожайностью.
Некоторые вопросы и ответы о растворимости модифицированных пептидов
4. Как судить о растворимости модифицированного пептида из последовательности?
(1) Модифицированный пептид, содержащий высокую долю гидрофобных аминокислот, таких как LEU, VAL, IIE, MET, PHE и TRP, нелегко растворим в водном растворе или почти нерастворим. Эта аминокислота может быть проблематичной либо при очистке, либо в синтезе.
(2) the proportion of hydrophobic amino acids under normal conditions < The proportion of charged amino acids can reach up to 20%. If the N or C of the modified peptide is short, the increase of polar amino acids can also improve the solubility.
5. Почему трудно синтезировать CYS, MET или TRP?
A: Модифицированные пептиды, содержащие Cy, MET или TRP, не могут быть синтезированы, а продукты высокой чистоты трудно получить. В основном это связано с тем, что эти группы менее стабильны и подвержены окислению. Использование и хранение этих модифицированных пептидов требуют особой помощи для предотвращения повторного открытия крышки.
6, почему какой -то синтетический выход или чистота будет очень низкой?
A: Существует значительная разница между синтезом модифицированных пептидов и синтезом праймеров. Есть очень мало праймеров, которые не могут быть синтезированы, но часто есть модифицированные пептиды, которые нельзя синтезировать. Такие, как Val, Ile, Tyr и Trp, Leu, PHE, GLN и Thr -аминокислота вблизи или петли, модифицированные пептиды не могут растягиваться в процессе синтеза, синтетическая эффективность ниже. Эффективность синтеза и чистота продукта очень низкая в следующих случаях, таких как: Repeat Pro, Ser-Ser, повторный ASP, четыре последовательных Gly и т. Д.
7. Как это очищено?
A: Модифицированные пептиды, как правило, очищаются с помощью обратной фазы колонки (например, C8, C18 и т. Д.) При 214 нм. Буферная система, как правило, представляет собой решение, содержащее TFA, ph2.0. Buffera содержал 0,1%TFAINDH2O, а буфер содержал 1%TFA/ACN/PH2,0. Он был растворен в буфере перед очисткой; Если раствор не является удовлетворительным, растворяйтесь с буфером, то разбавляйте буфером; Для очень гидрофобных модифицированных пептидов иногда добавляется небольшая коммерческая или уксусная кислота.
Время сообщения: 2025-07-01