Антигены рекомбинантных белков часто имеют несколько разных эпитопов, некоторые из которых являются эпитопами последовательностей, а некоторые - структурные эпитопы. Поликлональные антитела, полученные иммунизирующими животными с денатурированными антигенами, представляют собой смеси антител, специфичных для отдельных эпитопов, и могут использоваться в целом для обнаружения природных структур или денатурированных целевых белков. Побочным преимуществом использования денатурированных белков в качестве иммуногенов является то, что денатурированные белки, как правило, являются более иммуногенными и могут стимулировать сильный иммунный ответ у животных.
Система экспрессии Escherichia coli обычно выбирается для антигенных целей, потому что это самая дорогостоящая система с точки зрения времени и денег. Чтобы улучшить возможность экспрессии целевого белка и удобства очистки, иногда экспрессируется только небольшой фрагмент целевого белка, такой как специфический домен.
Трехмерная структура белков
Специфический домен белка
Если цель препарата антител предназначена исключительно для обнаружения WB, экономична и быстро использовать синтетический малый пептид в качестве антигена, но существует риск слабой иммуногенности или нерегеничности из-за неподходящего отбора сегмента пептидов. Поскольку препарат антител требует длительного периода, два или три различных пептидных сегмента часто выбираются для приготовления антител с использованием полипептидного антигена для обеспечения успеха эксперимента.
Чистота полипептидного антигена для иммунизации должна быть более 80%. Хотя более высокая чистота может теоретически получить антитела с лучшей специфичностью, на практике животные всегда производят большое количество неспецифических антител, тем самым маскируя преимущества чистоты антигена.
Кроме того, приготовление антител из мелких пептидов должно быть сшибовано с соответствующим антигеном-носителями для усиления его иммуногенности. Двумя общими антигенными носителями являются KLH и BSA.
Время публикации: 2025-07-03