Очистка белка - это процесс разделения белковых фракций определенной цели от тканей, клеток или белковых смесей. Очистка белка должна не только способствовать сильной чистоте изолированного белка, но и поддерживать биологическую активность белка. Следовательно, необходимо спроектировать одну или несколько схем очистки комбинирования в соответствии с различными свойствами белка. Основной стратегией очистки белка является использование сходства и различий между различными белками. На основании сходства между белками можно удалить небелковый материал, а затем целевой белок может быть разделен на основе различий белка. Особенно с быстрой разработкой технологий генетической инженерии, хотя многие белки экспрессируются генетической рекомбинацией, уровень очистки белка напрямую связан с чистотой и активностью белка. Следовательно, очистка белка остается важной темой в современной биотехнологии.
Цель
С одной стороны, выделение и очистка белков особенно важны для углубленного исследования структуры и функции белков, а с другой стороны, разделение и очистка белков также напрямую связаны с эффектом применения белков. Следовательно, очистка белка играет важную роль в исследованиях и применении биологической науки, а технология разделения и очистки белка также является ключевой технологией в биологической промышленности.
Путь
Принцип очистки белка заключается в разделении целевого белка с разумной эффективностью, скоростью, урожайностью и чистотой при сохранении его биологической активности и химической целостности. Основные этапы включают в себя отбор экспериментальных материалов, предварительную обработку, экстракцию белка, классификацию сырого белка, классификацию тонкого белка и идентификация белка.
Процесс очистки должен обратить внимание на: 1, чтобы минимизировать влияние на активность белка, например, для предотвращения слишком высокого или слишком низкого pH, высокой температуры и эффектов тяжелых металлов; 2. работать при низкой температуре; 3. Старайтесь сохранить ведущий уровень содержания белка в образце.
Классификация
Очистка белка может быть классифицирована в соответствии с типом метода очистки:
I. Метод осадков, включая осаждение соли, с использованием солевых ионов для разрушения затвердевшего слоя на поверхности белка, обнажая гидрофобную область, а затем осаждение для достижения цели предварительной очистки; Органическое осаждение, используя органические растворители для снижения активности воды, разрушает коагулированную пленку на поверхности белка, что приводит к осаждению белка. Осадки - это легкий метод очистки, но чистота не высока и может использоваться в качестве первичного процесса очистки.
Два, метод диализа, включая диализный мешок и метод ультрафильтрации. Благодаря диализу и ультрафильтрации могут быть устранены малые молекулярные примеси, а также можно заменить раствор белка.
3. Хроматографические методы включают хроматографию молекулярного ситового геля, ионообменную хроматографию, аффинную хроматографию (аффинная хроматография металлов, хроматография белка A/G, рецепторный белок, субстрат и т. Д.), Гидрофобная хроматография, обратная хроматография и высокая производительность жидкая хроматография. Для достижения лучших результатов часто требуется комбинация двух хроматографических методов, таких как аффинная хроматография и ионная хроматография.
В дополнение к вышеуказанным методам, существует много других методов очистки, таких как центрифугирование градиента плотности, которые подходят для производства белков с высокой чистотой, но требуют более высоких экспериментальных условий. Кристаллы белка подходят для анализа биологической структуры, такого как X-трансмиссия.
Время сообщения: 2025-07-01